狗狗细小病菌是什么?
犬细小病毒(Canine Parvovirus,CPV)是1978年日本学者发现的一种犬科动物特有的病毒, 属于细小病毒科、细小病毒属的单链DNA病毒. CPV具有抗原性和结构上的多样性和易变性特征, 使得其变异极为活跃和迅速, 目前主要存在两种变异型:CPV-2a(或称为经典变种)与CPV-2c[3].这两种不同的变异株可能起源于同一祖先,并通过序列分析确定了CPV-2a的起源时间大约在1970年左右且一直延续至今[4,5].而CPV-2c则可能在1996年被分离得到[6],并在世界各地持续流行,成为目前流行的CPV毒株类型. 在世界范围内,大多数地区都出现了以CPV-2a为主流毒株的趋势但也有一些国家出现了以CPV-2b为主的流行趋势如英国;美国部分地区是以CPV-2c为主要流行株, 而我国则以CPV-2b为现今的主要流行毒株。 在1994年后,国外陆续有报道出现CPV变异株CPV-2b、CPV-2c以及CPV-2d/e等[7~9].在我国,20世纪末也有文献报道了CPV变异株的存在[10], 但均没有进一步的研究来证实CPV变异株对我国地区的威胁性。
1987年以来,国内许多地区曾发生过由CPV引起的急性出血性肠炎病例及犬群暴发性流行性感染,造成大量犬死亡。这些CPV变异株是否已经传入中国并形成流行株还需要进一步的证据支持。因此对CPV进行广泛深入的流行病学调查研究对于控制该病的发生和发展有着重要的意义。本文通过PCR方法对全国各地收集到的疑似CPV阳性病料进行检测,并对检测结果进行了统计分析和流行病学研究,旨在探讨当前我国CPV变异毒株的状况及其分布特点,为其防控提供依据。 1材料与方法 1.1标本来源 从全国23个省、自治区采集送检的病料,共计470份,包括腹泻粪便(384份)、呕吐物(46份)、血液样本(12份)和静脉血样本(28份)见表1 (其中部分采样地未获得粪便样品,所以实际采样量小于表中所列数量)
1.2仪器和试剂 PCR扩增仪(TGRADIENT, Bioer Technologies Co Ltd) , 恒温振荡器(SHZ-D,郑州宏源电子仪器厂) ;紫外分光光度计(GBC 912 UV Viscolab) ;凝胶成像系统(BioRad MiniFusion II, USA );微量移液器;琼脂糖(Bioline AG);Ex TaQ DNA聚合酶(TaKaRa公司);dNTP(大连宝生物工程有限公司);PCR引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成;其余常规试剂均为国产分析纯级产品。
1.3诊断方法 对送检的病料用ELISA法检测血清中CPV特异性抗体水平, 同时取健康犬血清做阴性对照。按照ELISA试剂盒(北京博奥森生物科技有限公司生产)操作规范进行实验并进行统计学处理
结果
2.1PCR扩增产物的电泳检测结果 根据测序结果设计一对特异性引物, 对所提取的基因组DNA进行PCR扩增后,分别电泳结果如图1所示
2.2PCR扩增阳性样品基因型的鉴定 将回收得到的片段送交北京六合华大基因科技有限公司进行测序,并将测得的序列提交Genbank,获得序列号JN033658至JN033674。利用BLAST软件将其与已知CPV毒株进行同源性比较, 结果显示这6个核苷酸序列与CPV-2a高度相似,推测此6个核苷酸序列所对应的氨基酸序列也与CPV-2a相同,故确定为CPV-2a变异株
2.3PCR扩增阳性样品基因型分布 运用Excel2003软件对所扩增出CPV-2a基因型的6个克隆进行序列分析,并与标准CPV-2a进行比对,结果发现序列完全一致,由此确定该6个克隆均由CPV-2a变异株引起。 各省份的PCR扩增结果表明,除了吉林、内蒙古、青海三省无阳性外,其他各省均有不同程度的检出率,说明CPV变异株已在多个省蔓延开来,具体统计数据如下:广东61%(217/357),新疆47%(16/34),黑龙江36%(22/61),广西32%(24/75),河南30%(155/519),安徽29%(20/69),山东29%(22/76),江西25%(25/100),湖南23%(9/39),湖北22 %(17/77),宁夏21%(10/47),山西19%(12/63),云南19%(7/37),福建17%(16/93),四川17%(11/65),河北15%(13/87),陕西12%(10/83),甘肃12%(1/8),天津11%(3/27),贵州10%(2/20)西藏9%(2/22)辽宁8%(3/38)江苏8%(3/37),浙江8%(1/13),海南8%(2/25),吉林,内蒙,青海三省均无 2.4不同性别样本检测结果 通过对各地送检的470份病料进行基因分型的结果显示,共有330份病料为阳性(占69%)。将结果分为两组进行对比,其中男性178份、女性152份。经x²检验